Mikrotom

En mikrotom (fra oldgræsk μικρός mikros "lille" og τομή tomé "skæring, skæring") er en skæreenhed, der kan bruges til at skabe meget tynde sektioner. Det bruges til at fremstille mikroskopiske prøver, der senere skal røntgenstråles (f.eks. Biologisk væv ). Typiske anvendelsesområder er hovedsageligt bløde materialer og materialer , såsom inden for medicin og biologi ( Histotechnik ) samt analyse af plast. Biologisk materiale hærdes normalt ved fiksering inden skæring og gøres derefter skårbart ved "indlejring", dvs. inkludering med et flydende stof ( paraffin , syntetisk harpiks ), som senere hærder. Forskellige typer mikrotom (se nedenfor ) er tilgængelige til oprettelse af sektionerne afhængigt af anvendelsesområdet . Skærets tykkelse er væsentligt mindre end diameteren på et menneskehår og er typisk 0,1 til 100 um. Brugen af ​​en mikrotom kaldes en mikrotomi .

Alternative metoder til produktion af tynde prøver er produktionen af tynde sektioner til metaller, klipper, mineraler, knogler og tænder, elektropolering til metaller og ionfortynding .

historie

Mikrotom fra Cummings 1770
Mikrotom (C. Reichert, Wien, 1905–1915)
Roterende mikrotom ældre design
Klip af en fugl

For at forstå strukturen af ​​et objekt skal man undersøge dets indre. I de tidlige dage med lysmikroskopi blev der foretaget håndskæringer med barberblade, hovedsagelig fra planter eller dele af dyr. For at genkende strukturer af et objekt meget nøjagtigt kræves meget tynde, ensartede snit i størrelsesorden 10 til 100 µm, som kan undersøges i transmitteret lys. Indretningerne til fremstilling af sektioner blev kaldt skæremotorer indtil 1839 , hvor Jacques Louis Vincent (1770–1841) og Charles Louis Chevalier (1804–1859) skabte udtrykket ”mikrotom”.

Sandsynligvis blev den første enhed til at foretage sådanne nedskæringer lavet omkring 1770 af George Adams, jr. (1750–1795) opfundet og videreudviklet af Alexander Cumming . Det var en håndholdt model, hvor prøven blev holdt i en cylinder, og sektionstykkelsen (højden af ​​prøven) blev indstillet med en skrue. I 1835 omdannede Andrew Pritchard skæren til en bordmodel ved at fastgøre den til et bord med en klemme og således kunne betjene kniven med begge hænder.

Den første slædemikrotom blev opfundet af George Adams i 1798 (?). Udviklingen af ​​den roterende mikrotom fandt imidlertid sted meget senere (1883 og 1886).

For at kunne producere tynde snit blev andre hjælpemidler såsom den dobbelte kniv med justerbar knivafstand udviklet af Gabriel Gustav Valentin i 1838 . På grund af hærdningsteknikken for biologiske prøver og mekaniske problemer (stabilitet og omskærbarhed af bladene) førte denne åbenlyse løsning, en dobbeltbladet kniv, ikke til den ønskede succes med frihåndsbetjening.

Nogle kilder hævder, at mikrotomen blev opfundet af den tjekkiske fysiolog Jan Evangelista Purkyně . Det rapporteres flere gange, at Purkinje var den første til at bruge mikrotomen uden at give nogen datoer. (Se også Jan Evangelista Purkyně # videnskabelige forskningsområder ).

Purkinje selv skriver imidlertid i et essay fra 1842: ”Der er gjort flere gange forsøg på at opfinde komplekse mikrotomer for at opnå og formere de fineste sektioner.” Han beskriver et ”arbejde om mikroskopet” af Chevalier, hvor Adams (1770 ) som opfinder og Cumming er navngivet som mikrotomens fuldkommenhed, såvel som "endelig Custences nyere tid, som sandsynligvis kun er kommet lidt opmærksomhed til Tyskland". Purkinje fortsætter: ”Her i Wroclaw, Dr. I en periode var Oschatz meget travlt med at bygge og perfektionere sådanne instrumenter. Endelig lavede den lokale dygtige Mechanicus Rösselt en baseret på sin egen idé. Disse instrumenter kan være ret anvendelige til hurtig fabriksreplikering af suiter eller endda af de samme tværsnit som fytotomiske præparater, når deres anvendelse skulle blive mere udbredt, de synes mindre egnede til faktisk forskning, fordi det tager for lang tid at rette objekterne , og skulle gentages for ofte for en undersøgelse, der bevæger sig i alle retninger. "

Desuden ses anatomisten Wilhelm His (1865) lejlighedsvis i litteraturen som opfinderen af ​​mikrotomen . I sin beskrivelse af en mikrotom fra 1870 skriver His: ”Enheden tillod mig at arbejde med præcision, der aldrig ville have været mulig med enhånds snit. Han gjorde det muligt for mig at få uafbrudt klipningssekvenser af de undersøgte objekter. ” Samtidig hævder han dog også, at (i litteraturen) er der (allerede) blevet specificeret et antal apparater til fremstilling af mikroskopiske sektioner, og at hans enhed er en forlængelse af en tværskærer af professor Hensen. Årsagen til at blive navngivet som opfinderen kan være, at Wilhelm His bidrog væsentligt til den brede accept af enheden med sit arbejde.

Sammen med mikrotomerne fortsatte præparationsteknikken - bestående af fikseringsmetoden, indlejring og farvning af prøver - med at udvikle sig. Den selektive farvning af prøven fører kun til nyttige resultater, hvis prøvetykkelsen forbliver konstant. Dette forhindrede forskelle i tykkelse fra at føre til større farveændringer end forskelle i prøvestrukturen. Oprettelsen af ​​meget tynde og frem for alt ensartede tykke sektioner med en mikrotom sammen med den selektive farvning af visse cellekomponenter eller molekyler øgede synligheden af ​​mikroskopiske detaljer med mindst en størrelsesorden i slutningen af ​​det 19. århundrede.

I 1870'erne udviklede Richard Thoma (læge) en anordning til fremstilling af tynde histologiske parafinsektioner til mikroskopisk undersøgelse. Denne slædemikrotom blev masseproduceret af Rudolf Jung i Heidelberg fra 1881 og blev brugt over hele verden indtil midten af ​​det 20. århundrede (Thoma microtome). Andre producenter af mikrotomer var virksomhederne C. Reichert, Wien og E. Leitz , Wetzlar, hvis respektive forretningsområder nu alle er blevet fusioneret til Leica Microsystems GmbH , Wetzlar.

En detaljeret afhandling om mikrotomens historie kan findes i Gilbert Morgan Smiths gennemgang . Der er også adskillige historiske billeder af de tidlige enheder. Baseret på dette giver Krause et eurocentrisk kig på mikrotomens historie.

Mekaniske mikrotomer

De fleste mikrotomer består af en knivblok med en udskiftelig kniv, en prøveholder med en prøve og en "fødemekanisme". Afhængigt af anordningstypen flyttes prøven eller kniven under skæring, hvor kniven presses gennem prøven og afskærer et tyndt lag af plader på grund af kileeffekten (sektionsekstraktion). Efter hvert snit sikrer tilførselsmekanismen et automatisk skift, den såkaldte indføring, så der oprettes et snit af samme tykkelse i den næste cyklus. Sektionstykkelsen kan reguleres nøjagtigt ved hjælp af en tilsvarende justeringsmekanisme.

Forskellige enhedstyper skelnes afhængigt af strukturen. De vigtigste typer er beskrevet nedenfor. De specificerede sektionstykkelser er orienteringsværdier. Den passende sektionstykkelse afhænger af materialet i prøven, undersøgelsesmålsætningen og forbehandlingen (fiksering, indlejring, histoteknologi).

Sledemikrotom

Detalje af slædens mikrotom: slæde med kniv (forgrund); skåret prøve (baggrund)
Sledemikrotom med fast prøve og bevægelig kniv

I tilfældet med slædemikrotomet er prøven normalt fastgjort på en blokbærer, mens kniven bevæges frem og tilbage på en stort set tung "slede". I dag er diaset på et bælte monteret på ruller. Med mange glidemikrotomer kan kniven vippes til skæreretningen. Denne vinkel er kendt som deklination . Denne orientering reducerer trykket ved skæring sammenlignet med en kniv placeret på tværs. Typiske anvendelsesområder er store, bløde prøver, f.eks. B. biologiske præparater indlejret i paraffin. Den typiske snittykkelse af slædemikrotomen er 1 til 60 µm (muligvis op til 300 µm).

Alternativt anvendes en variant af slædemikrotomen undertiden, der kaldes den basiske slædemikrotom . Her er kniven fastgjort, og prøven trækkes igennem på glidebanen under kniven.

Roterende mikrotom

Roterende mikrotom med svinghjul (højre)

Instrumenterne af denne type er også kendt som minot mikrotomer. Selvom de drives af en roterende bevægelse, omdannes dette til en lige bevægelse, så den faktiske skærebevægelse (som udføres her af objektet) består af en simpel bevægelse opad og nedad. I tilfælde af en roterende mikrotom er kniven typisk arrangeret vandret og stationær.

Princippet om prøvebevægelse, når der laves et afsnit om en roterende mikrotom

Grundprincippet for en skæreproces er forklaret i nedenstående skitse. Prøveholderens nedadgående bevægelse skubber kniven gennem prøven (position 1 til position 2). Den tynde sektion er derefter på kniven. Efter udskæringen trækkes prøveholderen lidt tilbage, så prøven ikke trækker langs kniven under den opadgående bevægelse, der nu følger. På det højeste punkt af bevægelsen leveres prøven, dvs. prøveholderen bevæges nu fremad så langt, at der oprettes et tyndt afsnit af den samme sektionstykkelse under den næste nedadgående bevægelse. Skæringen kan enten fjernes individuelt fra kniven, eller du venter, indtil flere på hinanden følgende snit er opstillet for at danne et skærebånd og derefter tage dem af som et bånd (se billedet til højre).

Svinghjulet kan drejes manuelt på mange mikrotomer. Det har også den fordel, at der foretages et rent snit, fordi svinghjulets relativt store masse betyder, at forskelle i prøveens hårdhed ikke straks fører til væsentlige ændringer i hastigheden i snittet. Det roterende svinghjul er også integreret i huset på nogle nyere modeller. Den typiske sektionstykkelse af den roterende mikrotom er 1 til 60 µm (muligvis op til 300 µm). Til hårde materialer (f.eks. Indlejring i syntetiske harpikser) er halvtynde snit med en tykkelse i området 0,5 µm mulige med godt udstyr.

Fryser mikrotom

Kryostat til histoteknologi

Til sektionering af frosne prøver kan mange roterende mikrotomer omdannes til en såkaldt frysning eller kryomikrotom ved at tilpasse et kammer afkølet med flydende nitrogen (prøven er praktisk talt i en fryser med åben top under sektionering). Den lave temperatur bruges til at øge prøveens hårdhed og dermed gøre den i stand til at skære. Dette påvirker primært enheder, der er egnede til ultramikrotomi eller til semi-tynde snit. Når sektionerne oprettes, skal både prøvetemperaturen og knivtemperaturen reguleres og optimeres til prøvematerialet og sektionstykkelsen.

Derudover er der også kryostater i histoteknologien, der er optimeret til hurtige vævsafsnit , og hvor den komplette mikrotom er placeret i kølekammeret. Alle arbejdstrin fra hurtigfrysning til skæring til montering på et objektglas foregår i enheden.

Ultramicrotome

Skærebånd ca. 16 fjernede ultratynde snit (ca. 70 nm tykke) på vandoverfladen af ​​en diamantkniv
Ultramicrotome til opskæring af harpiksindlejrede prøver til lys- og elektronmikroskopi

En ultramikrotom bruges til at producere ekstremt tynde sektioner og fungerer som en "normal" roterende mikrotom, men mekanikken er designet til et meget fint foder. I stedet for en mekanisk tilførsel anvendes her også en tilførsel gennem den kontrollerede lineære udvidelse af prøveholderen ved hjælp af opvarmning. Sådanne ekstremt tynde sektioner kræves hovedsageligt til undersøgelser med transmissionselektronmikroskopet og mere sjældent for lysoptiske mikroskoper . Den typiske tykkelse af et snit er mellem 10 og 500  nm . På grund af snittets lille tykkelse er det svært at fjerne dem direkte fra kniven. Derfor skæres nedskæringerne normalt på overfladen af ​​en væske (f.eks. Vand) og fiskes derefter af. Sektionens tykkelse og ensartethed kan estimeres ved hjælp af interferensfarver.

Vibratome

Med vibratomer genereres skæreeffekten af ​​et vibrerende blad (f.eks. Barberblad). Skæringen foretages mindre ved tryk end ved bladets bevægelser sidelæns. Vibratome bruges hovedsageligt til ubehandlede biologiske prøver. På grund af den lavere mekaniske belastning er der ikke behov for at integrere prøven. På grund af vibrationerne er snitbilledet dog normalt betydeligt dårligere end med de førstnævnte mikrotomtyper. Sektionstykkelsen er over 30 µm.

Så mikrotom

Savmikrotomen er særligt velegnet til meget hårdt materiale som f.eks B. ben og tænder egnede. Med mikrotomer af denne type roterer en diamantbesat indre diameter sav, der slibes gennem prøven i en defineret afstand. Den mindste sektionstykkelse er over 30 µm og muliggør derfor kun forholdsvis grove snit.

Laser mikrotom

Lasermikrotomet er et instrument til berøringsfri skæring af prøver. Ud over de traditionelle anvendelser af mikrotomer er det særligt velegnet til at skære biologiske væv i deres oprindelige tilstand (fx lever, nyre, hud osv.). Det er ikke nødvendigt at forberede prøverne ved indlejring, frysning eller kemisk fiksering. Dette undgår stort set dannelsen af artefakter . På den anden side kan meget hårde materialer som knogler og tænder eller endda keramik 'skæres'. Afhængig af prøvematerialets egenskaber er sektionstykkelser på 10 til 100 µm i øjeblikket  mulige.

Princippet om lasermikrotomet

I modsætning til mekanisk fungerende mikrotomer anvendes en ultrakort pulslaser her som et skæreværktøj. Laseren udsender stråling i det nærmeste infrarøde område . I dette bølgelængdeområde kan laseren trænge ind i biologisk væv, men også andre materialer, op til en vis dybde uden synlig skade. Et stærkt fokus i det indre af prøven resulterer i meget høje intensiteter på over en TW / cm² ved fokuspunktet . De resulterende ikke-lineære interaktioner fører til det, der er kendt som et optisk gennembrud, som inducerer en materialeseparation, der er begrænset til fokus. Denne proces er også kendt som fotodisruption. På grund af den korte pulsvarighed på nogle få femtosekunder (1 fs = 10-15  s) afsættes kun en meget lille mængde energi i området for et par nanojoules i prøven pr. Impuls . Dette begrænser interaktionszonen til en diameter på mindre end et mikrometer. Uden for denne zone opstår der ingen termisk skade på grund af de ultrakorte interaktionstider.

Laserstrålen afbøjes af et hurtigt scannerspejl, mens en tredimensionel positioneringsenhed samtidig bevæger prøven frem og tilbage. I kombination med en høj gentagelsesfrekvens gør denne procedure det muligt at scanne større områder inden for en kort periode.

Ud over lasermikrotomet er der også lasermikrodissektion til udskæring af områder inden for et vævsafsnit, celleudstrygning osv. Eller til sortering af små partikler.

Mikrotomkniv

Den anvendte type mikrotomkniv afhænger af materialet og forbehandlingen af ​​prøven samt testmål (f.eks. Sektionstykkelse).

Knivtyper og slibningstyper

Tværsnitsform af mikrotomknive med forskellige typer snit

Der anvendes traditionelt relativt tunge stålknive eller hårde metalknive med en tyk ryg og med forskellige former (profil), som generelt er identificeret med bogstaverne A, B, C og D. Mikrotomknivene af den afskårne type A og B er ekstremt skarpe på grund af den planokonkave form, men også meget følsomme og derfor kun velegnede til meget bløde prøver som paraffin eller opskummet materiale. Kileformen af ​​type C-snittet er meget mere stabil og bruges derfor også til noget hårdere materialer såsom syntetisk harpiks eller til frosne snit. Med knivtypen med form D er kun den ene side af kniven slibet. Den forreste slibevinkel på ca. 45 ° øger stabiliteten igen, men gør også kniven meget stump. Denne knivform bruges kun til hårdere materialer.

I stedet for disse klassiske mikrotomknive z. B. brugte ofte engangsklinger for at spare omkostninger. Nogle af disse er lidt mere stumpe end de klassiske mikrotomknive, men frem for alt er de betydeligt tyndere og derfor mere fleksible. I tilfælde af hårdere prøver kan kniven derfor vibrere og dermed udsving i lagtykkelsen i snittet. Engangsklinger anvendes derfor hovedsageligt til blødere materialer.

Glas- eller diamantknive kræves til ultramikrotomer. Ved nogle få millimeter er skærebredden på sådanne knive betydeligt mindre end klassiske mikrotomknive. Glasknive er lavet af et par millimeter tykke glasstænger ved at knække dem umiddelbart før brug. Dette skaber en ekstremt glat og skarp brudkant på glassets smalle side, som er brudt i trekanter. Glasknive bruges typisk til forskæring af prøven (trimning). De kan suppleres med et lille trug, der er fyldt med vand, f.eks. Med tape. Som med diamantknive kan de enkelte snit derefter flyde på vandoverfladen.

Knivernes skarphed og hårdhed er afgørende for et godt resultat. Stumpe stålknive er slibet med specielle slibepastaer, der indeholder diamantpartikler. Der er specielle slibeanordninger til dette. Håndslibning på slibebånd og pinde er også mulig, men kræver en masse erfaring.

Skærevinkel: tilbøjelighed og hældning

Definition af udtrykket deklination i mikrotomi

Den Deklinationen er vinklen mellem retningen af kniven kant og retningen af snittet (se figuren til højre). Med mange glidemikrotomer kan den indstilles mellem 90 ° og 160 °. Hvis kniven er placeret på tværs (deklination = 90 °), sker udskæringen kun ved at skubbe kniven gennem prøven. De kræfter, der virker på kniven, er signifikant større, end når kniven er orienteret i en vinkel i forhold til skæreretningen (deklination 120 ° til 160 °). I sidstnævnte tilfælde letter en relativ bevægelse med en del parallel med knivkanten skæringen. Denne indstilling bruges især til store og hårde materialer. Fordelen ved den tværgående variant er, at der med passende materiale kan oprettes skærebånd (flere snit i træk).

Definition af udtrykket hældning i mikrotomi

Den hældning kniven til modellen plan kaldes hældning. Denne vinkel skal vælges korrekt for at få et optimalt skæreresultat. Det afhænger af den nøjagtige knivgeometri, prøven, skærehastigheden og mange andre parametre. Typisk er hældningsvinkler, hvor en lille frigangsvinkel på nogle få grader forbliver mellem klargøringsplanet og kniven .

Hvis denne vinkel er indstillet for flad, skærer kniven ujævnt, eller områder af den nederste del af kniven berører den nyskårne overflade, så den smøres ud.

Hvis vinklen på den anden side vælges for stor, vil kniven "rumle" over overfladen, og periodiske tykkelsesvariationer i snittet vil forekomme. Hvis hældningsvinklen er endnu større, er sidebelastningen på skærekanten ekstremt høj, og knivkanten kan bryde af.

Forberedelse og opfølgning af prøverne

Biologiske og andre bløde materialer kræver omfattende forbehandling for at størkne dem og dermed gøre dem udskærbare. Metoderne til denne forbehandling, såsom fiksering og indlejring, er en del af histoteknologien . Til indlejring er objektet normalt fuldstændigt gennemblødt i en væske, som derefter laves til at størkne. På denne måde har præparatet en ret ensartet styrke igennem. Typiske indlejringsmedier er paraffin , polyethylenglycol , celloidin , gelatine , agar og syntetiske harpikser .

Til nogle undersøgelser opnås størkning af det materiale, der skal skæres, ved frysning, f.eks. B. hvis indlejring ville føre til en ændring i prøven eller forhindre efterfølgende farvning. Prøver, der indeholder vand, skal fryses med stød ved en kølehastighed på mindst 10.000 K / s ( Kelvin pr. Sekund), så vandet størkner i amorf tilstand. Ellers dannes der iskrystaller, hvilket vil føre til fryseskader i materialet. Sektionerne fremstilles derefter på frysende mikrotomer, normalt ved -20 ° C.

Efter sektionering skal sektionen overføres til en bærer til yderligere behandling (f.eks. Histokemisk, immunhistokemisk farvning). Til lette mikroskopiske præparater anvendes objektglas . Større paraffinsektioner får først lov til at flyde på en overflade af vand (45 ° C) og udglattes af overfladespændingen . Derefter skubbes et dias under snittet i en vinkel under vandoverfladen og flyttes derefter forsigtigt opad. Den ene kant af snittet klæber til glasset på grund af klæbende kræfter og trækkes derved på gliden. Det samme princip bruges også til ultratynde sektioner til elektronmikroskopi , som er for tynde og ustabile til mekanisk løftning. Her er væsketrug fastgjort direkte til kniven. Udskæringerne danner en skærende bånd (se billede af ultramikrotom) og derpå fisket med en fin metal gitter .

Ansøgning

I histologi (vævsteori) er forberedelse af sektioner et grundlæggende krav til undersøgelse af vævsfunktioner. Specielle frysemikrotomer (kryostater) anvendes blandt andet til hurtig sektionsdiagnostik for at opnå klarhed om fuldstændigheden af ​​fjernelsen af ​​en tumor under operationen. Baseret på resultaterne vil der blive taget en beslutning om, hvordan operationen skal fortsættes.

Derudover anvendes mikrotomer til materialeanalyser. Eksempler inkluderer lysmikroskopisk eller spektroskopisk undersøgelse af lagsystemer (især mikroskopisk IR-spektroskopi under transmission) eller polarisationsmikroskopisk undersøgelse af sfærulitter . Til transmissionselektronmikroskopi er meget tynde snit nødvendige for at være i stand til at bestråle dem med elektroner.

I oftalmologien være inden for omfanget af brydningskirurgi kendt som mikrokeratomer (et slags Callous plan), eller mere for nylig, den femtosekundlaser anvendt (også kaldet flap) til en 150 um tyk hornhindeflappe, der skal skæres og derved udsætte de underliggende lag af hornhinden til en Excimerlaser-operation. Denne enhed kaldes undertiden en mikrotom.

Individuelle beviser

  1. ^ A b John Hill: The Construction of Timer, fra dens tidlige vækst; Forklaret ved mikroskop og bevist fra eksperimenter i et stort udvalg af slags. 1770, s. 5–11, plade I.
  2. ↑ a b c Gretchen L. Humason: Teknikker til væv af dyr . WH Freeman and Company, 1962, s. 43, kapitel 4 (Microtomes og Microtome Knives).
  3. ^ John Quekett: En praktisk afhandling om brugen af ​​mikroskopet . Hippolyte Bailliere, London 1848, s. 306, kapitel XII (Microtomes og Microtome Knives).
  4. ↑ Anonym: En mikrotom fra det attende århundrede . (PDF) I: Journal of the Royal Microscopical Society , 1910, The Royal Microscopical Society, Oxford GB, s. 779-782.
  5. ^ A b Gilbert Morgan Smith: Udviklingen af ​​botanisk mikroteknik. I: Transactions of the American Microscopical Society 34, nr. 2. 1915, s. 71-129.
  6. Hart Peter Harting: Mikroskopet. . F. Vieweg & Sohn, Braunschweig 1859, s. 363–366, afsnit 292.
  7. ↑ Erich Hintzsche : Krav og udvikling af mikrotomi . I: Ciba magazine (Basel) . Ingen. 8 , 1943, s. 3082-3084 ( PDF ).
  8. ↑ Histologi . I: Microsoft Encarta online, marts 2009.
  9. ↑ Detlev Ganten: Håndbog om molekylær medicin . Springer, ISBN 3-540-64552-7 ( Google Books ).
  10. ↑ Werner Gerabek, Bernhard D. Haage, Gundolf Keil, Wolfgang Wegner: Enzyklopädie Medizingeschichte . Walter de Gruyter, 2005, ISBN 3-11-015714-4 ( Google Books ).
  11. ↑ Se også JE Purkinje: Den mikrotomiske presse, et uundværligt instrument til mikroskopiske undersøgelser. I: Arkiv for anatomi, fysiologi og videnskabelig medicin. 1834, s. 385-390.
  12. ↑ J. Purkinje: mikroskop. Anvendelse og anvendelse i fysiologiske studier . I: Rudolph Wagner (red.): Kort ordbog over fysiologi med hensyn til fysiologisk patologi . Andet bind. Braunschweig 1844, s. 411-441 ( Onlineversion tilgængelig fra Google Books - (Den citerede passage er på side 424).
  13. ^ Wilhelm His. I: Encyclopædia Britannica Online. Encyclopædia Britannica, adgang til 24. marts 2009 .
  14. Ios Marios Loukas, Pamela Clarke, R. Shane Tubbs, Theodoros Kapos og Margit Sportwetten: Hans familie og deres bidrag til kardiologi . I: Elsevier (red.): International Journal of Cardiology . 123, nr. 2, Irland, 2008, s. 75-78. doi : 10.1016 / j.ijcard.2006.12.070 .
  15. ^ Wilhelm His: Beskrivelse af en mikrotom . (PDF) I: Arkiv for mikroskopisk anatomi , 6, 1870. Verlag Max Cohen & Sohn, Bonn, s. 229-232, panel III, doi: 10.1007 / BF02955980 .
  16. Le Ole Daniel Enersen: Wilhelm His .
  17. ↑ Ernst Mayr: Udviklingen af ​​den biologiske tankeverden. Springer, 2002, ISBN 3-540-43213-2 ( Google Books ).
  18. ↑ Werner Linß, Werner Linb, Jochen Fanghänel: Histologi: cytologi, generel histologi, mikroskopisk anatomi. Walter de Gruyter, 1998, ISBN 3-11-014032-2 ( Google Books ).
  19. ^ Richard Thoma, JF Lyon: Om et mikrotom . I: Virchow's Arch. 84, 1881, s. 189-191.
  20. ↑ Klaus Goerttler (red.): Biografisk leksikon til portrætsamlingen af ​​anatomisten Robert Wiedersheim .
  21. ↑ a b c d e f g h i j k l m Klaus Henkel: Skæring med mikrotomen . Microbiological Association Munich e. V., 2006, adgang til 15. februar 2009.
  22. ↑ Rudolf Krause: Encyklopædi for mikroskopisk teknologi . Urban & Schwarzenberg, Berlin 1926 (3. udgave), s. 1528-1548, bind II.
  23. ↑ a b c d e f g h i j Gudrun Lang: Histotechnik. Praktisk lærebog til biomedicinsk analyse. Springer, Wien / New York 2006, ISBN 3-211-33141-7 ( Google Books ).
  24. ↑ Stephen Peters: Frossen sektionsteknik . Patologiinnovationer (Freeze Section Technique Guide and Videos).
  25. ↑ Holger Lubatschowski 2007: Lasermikrotomi . ( Memento fra 9. oktober 2011 i Internetarkivet ) (PDF; 170 kB) WILEY-VCH, Biophotonics, s. 49–51.
  26. ↑ a b Irene K. Lichtscheidl (red.): Lysmikroskopi - teori og anvendelse . I: Lysmikroskopi online - teori og anvendelse. Universitetet i Wien, adgang til den 15. februar 2009 (PDF; 897 kB).
  27. ↑ A. Turzynski (red.): Schnellschnittdiagnostik . Patologi Lübeck, 15. februar 2009.
  28. ↑ T. Kohnen (red.): Mikrokeratome . adgang til den 15. februar 2009 (skematisk beskrivelse af arbejdet med mikrokeratom).
  29. ↑ Internet Media Services, Inc. (red.): Forståelse af LASIK . adgang til den 15. februar 2009 (beskrivelse af laser in situ keratomileusis (LASIK), inklusive video af en operation, engelsk).
  30. ↑ Steven H. Schwartz: Geometrisk og Visual Optik. McGraw-Hill, 2002, ISBN 0-07-137415-9 ( Google Books ).

Weblinks

Commons : Microtome  - album med billeder, videoer og lydfiler
Denne artikel blev tilføjet til listen over fremragende artikler den 22. marts 2009 i denne version .